Ratten  wurden  durch  intraperitoneale  Injektion  von  50  mg/kg  Pentobarbital  (25  mg/ml  in  0.9%  NaCl-Lösung)  narkotisiert.  Nach  Eröffnung  des  Abdomens  wurde  die  Leber  freipräpariert  und  zur  Vermeidung  einer  intravasalen  Blutgerinnung  Heparinlösung  in  die  Vena  portae  injiziert  (250  I.E.  in  0.5  ml).  Anschließend  wurde  der  Thorax  eröffnet,  die  Vena cava  inferior  unterhalb  des  Herzens  mit  einer  lockeren  Ligatur  angeschlungen  und  selbige  über  den  rechten  Vorhof  kanuliert.  Nach  Fixierung  des  Katheters  mittels  der  Ligatur  wurde  das  Organ  unter  Eröffnung  der  Vena  portae  und  Unterbindung  der  Vena  cava  inferior  unterhalb  der  Leber  zunächst  für  10  min  mit  Vorperfusionspuffer  bei  einer  Flußrate  von  10 ml/min vollständig blutleer gespült. Anschließend wurde zur Lösung der Zell-Zell-Kontakte die Leber für 10 bis 15 min mit Kollagenaselösung (0.5 mg/ml, entspricht ca. 100 I.E./ml) bei einer  Flußrate  von  10  ml/min  perfundiert.  Beide  Perfusionslösungen  waren  auf  37  °C  temperiert.  Im  Anschluß  wurde  das  Organ  vorsichtig  unter  Schonung  der  Organkapsel  herauspräpariert,  mit  Suspensionspuffer  abgespült  und  in  ein  steriles  50  ml  Kunststoffröhrchen mit 4 °C kaltem Suspensionspuffer überführt.

Alle folgenden Schritte wurden unter sterilen Bedingungen durchgeführt. Nach Eröffnung der Organkapsel  wurden  die  Hepatozyten  durch  Schwenken  mit  Suspensionspuffer  freigesetzt.  Zur  groben  Entfernung  von  Zellaggregaten,  Bindegewebs-  und  Kapselbestandtteilen  wurde  die  erhaltene  Suspension  durch  ein  Nylonnetz  der  Maschenweite  250  μm  filtriert.  Anschließend  wurde  die  Zellsuspension  für  5  min  in  der  5810R  Kühlzentrifuge  (Eppendorf)  bei  40  x  g  zentrifugiert,  um  nicht-parenchymale  Zellen  und  Zelltrümmer  zu  entfernen.  Nach  der Zentrifugation wurde der Überstand abgesaugt und das erhaltene Zellsediment in MX-82 Medium  +  10  %  FKS  (HOFFMANN  et  al.,  1989)  resuspendiert.  Die  Zellen  wurden  anschließend  durch  ein  Nylonnetz  der  Maschenweite  60  μm  filtriert,  um  eine  homogene  Zellsuspension  zu  erhalten.  Die  Zelldichte  wurde  in  einer  Fuchs-Rosenthal-Zählkammer  ermittelt, und die Zellvitalität mittels Trypanblau-Ausschluß bestimmt. Dazu wurde der 1:100 verdünnten  Zellsuspension  ein  äquivalentes  Volumen  einer  0.5%-ige  Lösung  des  Postvitalfarbstoffes Trypanblau zugesetzt. Die Zellvitalität betrug mindestens 90%.

Eine kluge und schöne Frau.

Trolls?

Ich glaube hier gibt es nur einen Troll. Moddin redet mit über 90.000 Fakeaccounts mit sich selber.

Naja, die Entropie deiner Beiträge sticht aber auch nicht gerade aus der Masse.